細胞融合法 河野憲二 大阪大学細胞工学センター 動物細胞への遺伝子導入法は,大 きく3つ の方法に分 けることができる.1つ は,本稿で述べるように,dna (rna)を 脂質二重膜の中にトラップし,膜 の融合を利 用して細胞内に注入する方法である.こ の方法には,赤 2. 血液凝固に関係する各種の酵素活性を阻害するために起きる。酵素は常温付近で活性化し、低温と高温に弱い。 参考ページ（血液） abo式血液型と血液の凝集素 図2 4種の異なる細胞を-196℃ まで凍結したと ここではタンパク質の抽出・細胞破砕法についてご紹介します。「タンパク質抽出手法の概要」では、各手法の特徴や対象サンプルを中心に一般プロトコールも記載していますので、ぜひ参考になさってください。 第2章 サンプルの採取、安定化およびタンパク質抽出(1) はじめに. タンパク質分析ワークフローで共通するはじめの数ステップは相互に関連し、サンプル供給源からサンプルを採取した後、安定化を行い、分析の目的に適したタンパク質集団を抽出します（図2.1）。 密度勾配遠心分離法について 東京医科歯科大学国府台分校 島 尾 和 男 緒 言 遠心分離法が分離精製における基本的な手技として広 く用いられているのは周知の通りであり,こ とに細胞化 学におけるHogeboom-Schneiderの 細胞成分の分別 タンパク質の抽出・細胞破砕法. 細胞分画法の注意点. 遠心分離は細胞液から取り出してきたいタンパクやdna断片、プラスミドdnaなどを分画する方法として不可欠な実験法です。今回は遠心分離の理論と具体的な実験法について触れていきます。 面積,す なわち細胞の大きさ,(2)その温度における細胞 a 酵母 b ヒト赤血球 図1 計算で求めた冷却速度と細胞内残存水分との 関係(2) a:酵 母細胞,b:ヒ ト赤血球.eqは その温度に平衡 な水分量を示す. 低温貯蔵、中でも冷凍貯蔵は、食品の栄養や風味を損なうことなく長期保存が可能な優れた保存法です。 では、なぜ食品は低温下だと長期保存することができるようになるのでしょうか？ 温度低下によって、食品にはどのような変化が起こるのでしょうか？ 細胞下分画法とタンパク質濃縮法は、飛躍的な発展を遂げているプロテオミクスの分野において、重要なメソッドとして位置づけられます。細胞下分画の単離や低存在量タンパク質の濃縮により、目的タンパク質の識別や研究がより効果的に行えます。 さて、ここまで細胞分画法の具体的な方法について述べてきましたから、ここからは実施する上での注意点を2つ紹介します。 ①等張な溶液に入れた状態で ②低温で行う。 まず等張な溶液に入れる理由につ … …細胞を破壊して細胞小器官などの細胞内の各構成要素を分離する方法。細胞小器官など細胞構成要素の働きや化学的組成を調べる目的で開発されたもので，細胞を機械的に破砕(細胞破砕cell homogenizationという)し，できるだけ生体内の状態のまま，均一な分画をうるようにくふうされている。 3．低温にする. -114.3℃のため凍らない。エタノールが低温の ほうがDNAは溶解度が下がり，DNA収率が 上がる。 ・染色液 酢酸カーミン染色液，酢酸オルセイン染色 液，ヘマトキシリン染色液など，細胞観察で染 色体を染色する液があれば調製する必要はな い。 準備 から細胞を回収し、記載の方法でタンパク質を抽 出して、電気泳動を行った結果を示しています。 ガラスビーズ法は細胞の約2.5倍容量のガラス ビーズと各抽出液を0.2ml 添加し、10分間ボルテックスを行うことにより タンパク質を抽出しました。 細胞分画法では以下の点に注意して実験を行ってください。 低温 で破砕液をつくる 細胞を破砕したときに、リソソームから加水分解酵素が出てきます。この酵素のはたらきで細胞小器官が分解されてしまします。